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N.Thézé n°4 - 1/10/10

BDA
Chapitre 2
Méthodologies et illustrations
IV- Analyse de la fonction des gènes :
2) par surexpression ectopique :

Mutant gain de Fonction : Par rapport a un embryon normal, il faut sur exprimer une protéine
exogène ; surexpression ectopique : pas forcément au même endroit que la protéine endogène.
Ciblage dans une cellule ou un territoire
-Si on part d’un gène :
Cela marche mal car les limites 5’ et 3’ d’un gène sont assez floues. De plus la transcription peut se
faire mais il peut y avoir un problème d’épissage. Donc pour faire un gain de fonction (gdf) ce n’est
pas judicieux
-surexpression de l’ARN m dans l’embryon par micro-injection ciblée :
Ciblage dans l’espace et dans le temps. Limité dans le temps, valable assez tôt lorsqu’on peut repérer
les cellules où on veut micro-injecter. Le problème c’est que l’embryon devient vite complexe.
Donc gdf faisable avec l’ARNm mais sur une fenêtre de temps courte
-à partir de l’ADNc:
On peut faire en sorte qu’il s’intègre tôt et on peut contrôler sa transcription.
On peut contrôler dans le temps la transcription. Ainsi on peut utiliser un ADNc car la transcription
sera plus tardive que le moment ou on aura injecté.
Comment sinon contrôler l’expression d’un ADNc dans l’embryon ?
Système inductible
Injection d’un ADNc dans un plasmide et on peut placer en amont un promoteur qui est actif au
moment ou on veut (stade gastrula, morula…) expression spatio-temporelle que l’on contrôle en
choisissant ce promoteur.
Double contrôle spatial et temporel :
On va produire une protéine chimérique dont une partie (récepteur) sera sensible si il ya présence
d’œstradiol ou pas. En fonction du fait qu’il y a fixation ou pas d’oestradiol la protéine heat shock se
détachera, permettant de libérer le site NLS.
Protéine de fusion aura une localisation cytoplasmique en absence d’œstradiol, en effet il ya aura un
domaine NLS qui sera démasqué lorsqu’il y aura de l’œstradiol, permettant la translocation dans le
noyau, avec l’expression d’une protéine active.

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