Histologie dias 1 Introduction .pdf

6/02/13

HISTOLOGIE GÉNÉRALE
BAC 1 Q2 MED
2012-2013
1

Dr Quatresooz P.

HISTOLOGIE GÉNÉRALE
  PPT:

e-campus, Myulg
  Travaux pratiques:
 
 

5 séances en ligne encadrées par séance aller et
retour
Syllabus en vente à AREM

  AIC:

apprentissage par intégration des
connaissances

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OUVRAGES DE RÉFÉRENCE

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MODULE MORPHOLOGIE
 

Anatomie macroscopique:
 
 

 

Anatomie du développement:
 
 

 

Introduction à anatomie, modules par système en Q3-4-5
Pr.P. Bonnet
Embryologie: modules par système en Q3-4-5
Pr.S. Perrier d’Hauterive

Anatomie microscopique:
  Cytologie: étude de la cellule; cf. Biologie Q1
 

Histologie
 
 

 

Générale Q2
Spéciale: modules par système Q3-4-5

Anatomie pathologique ou Histopathologie:
 
 

Générale
Spéciale

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ORGANISATION STRUCTURALE
Chimique:
 
 
 

Cellule: + petite unité de vie, unité
fonctionnelle de base
 

 

 
 

 

Atomes
Molécules: groupements d’atomes

Organites: composants microscopiques de la cellule

Tissu: ensemble de cellules différenciées similaires

exerçant une fonction commune
  Épithéliums
  Tissus conjonctifs
  Tissus musculaires
  Tissus nerveux
Organe: ensemble d’au moins 2 tissus, responsable
d’une fonction spécifique
Système: ensemble d’organes coopérant à
réalisation d’une même fonction
  Cardiovasculaire
  Respiratoire
  Néphro-urinaire
  Hématologique
  Cutané
  Digestif
  Génital
  Endocrinien
  Nerveux
  Locomoteur
  Immunologique
Organisme: niveau supérieur d’organisation
architecturale

Bac 1

Molécules

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http://iupucbio2.iupui.edu/anatomy/default.htm

 

Bac 2 et 3

Structure
cellulaire
normale

Structure
tissulaire
normale

Structure
organe
normale

Système
normal

Organisme
normal

Structures normales = fonctions normales = organisme sain

Molécules
Anormales

Structure
cellulaire
Anormale

Structure
tissulaire
Anormale

Structure
organe
Anormale

Système
Anormal

Organisme
malade

Structures Anormales = fonctions Anormales = Pathologie
6

Masters

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HISTOLOGIE - INTRODUCTION
  Histologie

= étude structure microscopique des
matériaux vivants et de la manière dont les
éléments sont en relation les uns avec les autres
sur les plans morphologique et fonctionnel
  Histologie humaine
 
 

Histologie générale = examen microscopique des
tissus
Histologie spéciale = examen de la façon dont les
tissus sont organisés et en relation les uns avec les
autres au sein d’un organe
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PRÉREQUIS POUR L’HISTOLOGIE
  Composition

et structure molécules:

chapitre 5 Campbell
  La

cellule (cytologie): noyau et organites:

chapitre 6-7 Campbell
  Cycle

et division cellulaire:

chapitre 12-13 Campbell

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Composition et structure
molécules du vivant
 

 

Protéines
  Glycoprotéines (protéine +
oligosaccharides par liaisons covalentes)
  Protéoglycanes (protéine centrale +
GAG; liaisons covalentes)
Glucides
  Monosaccharides et Disaccharides
  Polysaccharides
 

 

 

 

Glycosaminoglycanes (GAG)=
hétéropolysaccharides formés par répétition
unités disaccharidiques
  Acide hyaluronique
  Dermatane, kératane, héparane,
chondroïtine-sulfates
Glycogène

Lipides
  Triacylglycérols
  Phospholipides
  Stéroïdes
Acides nucléiques

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COMPOSANTS CELLULAIRES

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Membrane cytoplasmique
o 
o 

Structure: double couche phospholipidique
Fonctions: perméabilité, transports membranaires

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NOYAU

Figure 3–10 DNA transcription into messenger RNA (mRNA).
(Modified from Alberts B, Bray D, Lewis J, et al: Molecular
Biology of the Cell, 3rd ed. New York, Garland Publishing, 1994.)

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Figure 3–11 Ribosome formation. mRNA, messenger RNA; rRNA, ribosomal RNA.

(Modified from Alberts B, Bray D, Lewis J, et al: Molecular Biology of the Cell, 3rd ed. New York, Garland Publishing, 1994.)
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RETICULUM ENDOPLASMIQUE RUGUEUX

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RÉSUMÉ
 

Réticulum endoplasmique:
 
 

 

Ribosomes: synthèse protéines
 
 

 

 
 

Centre de tri, maturation,
transformations des molécules produites
par RE,
Formation vésicules de sécrétion
Développement +++ dans cellules
spécialisées dans sécrétion

Mitochondries:
 
 

 

Libres: protéines cytoplasmiques
RER: protéines destinées à membrane
ou sécrétion

Appareil Golgi:
 

 

RER: synthèse (glyco)protéines
REL: synthèse lipides

Conversion énergie chimique,
Nombre selon activité métabolique de la
cellule

Lysosomes: digestion intracellulaire

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Lipofuschine

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Mélanine
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CYTOSQUELETTE

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Soutien mécanique:
Division Adhérence
Résistance, traction Contraction Fuseau Interaction avec
musculaire mitotique Mb plasmique

Structure du
noyau

Forme
cellulaire

Cytosquelette

Déplacement
Cils
Flagelles

Migration

Transport (axonal) Organisation
Endocytose
spatiale du
(mobilité intraC)
cytoplasme

(mobilité cellulaire)

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CYTOSQUELETTE

Microtubules
Filaments d’actine
Filaments intermédiaires

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MICROTUBULES
o 

o 
o 

o 

o 
o 

Organisation spatiale des
cellules
Transport des organites
Distribution des récepteurs
membranaires
Battement des cils et
flagelles
Migration cellulaire
Division cellulaire

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MICROTUBULES:
ARCHITECTURE

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MICROTUBULES: POLYMÉRISATION

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MICROTUBULES: MAP DE STABILISATION
Microtubules labiles
Centrioles
Microtubules stables

Corpuscules basaux
Cils et flagelles

MAP
TAU
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MAP MOTRICES:

TRANSPORT ORGANITES/AXONAL

Transport
antérograde

Transport
rétrograde
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DIVISION CELLULAIRE

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AGENTS ANTITUMORAUX ANTIMITOTIQUES

Inhibiteurs
polymérisation
Inhibiteur
dépolymérisation

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COLCHICINE

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CENTRIOLES

Point de départ de polymérisation des
tubulines en microtubules: base cils/flagelles

Centrosome
Formation
fuseau mitotique

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CENTRIOLES

CENTROSOME

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MICROFILAMENTS ACTINE
  Migration

cellulaire
  Contraction
musculaire
  Squelette cellulaire
  Embryogenèse
(mouvements
tissulaires)
  Squelette villosités

51

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FILAMENTS INTERMÉDIAIRES
  Maintien

intégrité
cellulaire et tissulaire

52

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TYPES DE FILAMENTS INTERMÉDIAIRES

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CYCLE ET DIVISION CELLULAIRE
  Connaître

les différentes étapes du cycle

cellulaire
  Savoir reconnaître les différentes étapes
des divisions cellulaires
  Reconnaître des mitoses anormales

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Figure 3–12 The cell cycle in actively dividing cells. Nondividing cells, such as neurons, leave the cycle to enter the G0 phase
(resting stage). Other cells, such as lymphocytes, may return to the cell cycle.
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Copyright 2007 by Saunders, an imprint of Elsevier Inc.

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Figure 3–15 Immunoflorescent image of a cell in the prometaphase stage of mitosis. Note the spindle microtubules (green) and the
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chromosomes (blue).
(Courtesy of Alexey Khodjakov, PhD, Research Scientist and Associate Professor, Wadsworth Center, Albany, New York.)
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CYTOLOGIE - HISTOLOGIE: OBSERVER,
INTERPRÉTER IMAGES
  4
 
 
 
 

étapes:
Choix du matériel
Choix de technique permettant de visualiser ce
que l’on veut étudier
Production d’images
Interprétation des images obtenues

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CHOIX DU MATÉRIEL
ET DES TECHNIQUES
 

 

 

 

Cellules vivantes
(spermogramme)
Cultures cellulaires: recherche,
caryotype
Cellules séchées ou fixées:
  Frottis = étalement sur
lame; sang, des liquides
(LCR)
  Empreintes: apposition sur
lame
Tissu fixé:
  biopsie, ponction à l’aiguille,
chirurgie, autopsie
63

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CYTOLOGIE - HISTOLOGIE: OBSERVER,
INTERPRÉTER IMAGES
  4
 
 
 
 

étapes:
Choix du matériel
Choix de technique permettant de visualiser ce
que l’on veut étudier
Production d’images
Interprétation des images obtenues

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FIXATION
 
 
 
 
 
 
 

Préserver les structures tissulaires et
cellulaires
Durcissement des tissus
Éviter les artéfacts (gonflements, rétractions)
Permettre des colorations histochimiques
Permettre l’immunohistologie
Être peu ou pas toxique
Immédiate par immersion dans fixateurs
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BIOPSIE : FIXATEURS
  Liquide

de Bouin aqueux
  Formol tamponné à 10%
  Glutaraldéhyde
  Congélation
  Divers : contact préalable avec le laboratoire pour
toute étude particulière (étude enzymatique,
recherches virales,..)

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FORMOL TAMPONNÉ 10%
  Histologie

standard, nombreuses techniques
particulières (immuno, PCR, HIS)
  Prélèvement + de 1 cm, volume de fixateur = 10x
volume prélèvement
  Avantages :
 
 

Permet conservation prolongée
Délais d’acheminement > 24h

  Inconvénients
 
 
 

:

Temps de fixation + long (24-48h)
Liquide incolore
risque de confusion (eau,
LP,..)
Toxicité
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DU POT AU MICROSCOPE
  Description

macroscopique et dissection du
prélèvement
  Inclusion
  Réalisation des coupes histologiques
  Colorations : standard et spéciales

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Le prélèvement doit être échantillonné et la taille des
échantillons adaptée à celle de la cassette d’inclusion.

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INCLUSION
 

 

 

But = réalisation coupes
histologiques
Remplacement eau
tissulaire par paraffine
hydrophobe
Processus par étapes:
 

 

 

Déshydratation:
immersion dans bains
d’alcool
Remplacement alcool par
solvant organique
Remplacement solvant par
paraffine
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2-5 µ

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COLORATION
 

De routine ou HE
 

 

 

 

Hématoxyline: colorant
basique révélant les
substances acides
Éosine: colorant acide
révélant substances
basiques

Histochimie (colorations
spéciales): visualisation de
structures ou composants
particuliers par réactions
biochimiques
Immunohistochimie:
détection in situ d’antigènes
par liaison d’anticorps

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CYTOLOGIE - HISTOLOGIE: OBSERVER,
INTERPRÉTER IMAGES
  4
 
 
 
 

étapes:
Choix du matériel
Choix de technique permettant de visualiser ce
que l’on veut étudier
Production d’images
Interprétation des images obtenues

75

Dr Quatresooz P

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MÉTHODES D’ÉTUDES DES CELLULES ET TISSUS
 

 

Grossissement = rapport entre
dimensions apparentes de l’image et
réelles de l’object
Microscopie photonique:
  Pouvoir de résolution = 0,2 μm
  x1000 max.
  Limites: bactéries, mitochondries,
autres organites non visibles
  3 types:
 
 
 

 

Optique
Confocal
Fluorescence

Microscopie électronique
  Pouvoir de résolution: 0,2 nm (1000x
celle du m.o)
  X 2.000.000
  2 types:
 

 

À balayage: étude de surface, relief
(aspect 3D)
À transmission: étude ultrastructure
interne

76

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CYTOLOGIE - HISTOLOGIE: OBSERVER,
INTERPRÉTER IMAGES
  4
 
 
 
 

étapes:
Choix du matériel
Choix de technique permettant de visualiser ce
que l’on veut étudier
Production d’images
Interprétation des images obtenues
 Coloration
  Orientation
  Artéfacts
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COLORATION STANDARD
HE
 

Hématoxyline: colorant
basique révélant en bleu
les substances acides
(basophiles)
 

 

Noyaux, ribosomes
(ac.nucléiques) en violet-bleu

Éosine: colorant acide
révélant les substances
basiques ("éosinophiles »
ou acidophiles)
 

Cytoplasme, collagène,
mitochondries: rose
79

Dr Quatresooz P

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HISTOCHIMIE
 

Visualisation de structures particulières :
 
 
 
 
 

 

Recherches de germes :
 
 

 

Membranes basales : PAS
Fibres élastiques : orcéine
Fibres de collagène/Fibrose : trichrome de Masson, rouge Sirius
Fibres réticulées
Muscles
Bactéries, champignons, mycobactéries, parasites, spirochètes
PAS, Zhiel/FITE, Gram, Warthin-Starry, Grocott

Recherche de dépôts :
 
 

Amylose, Fer, Mélanine, Calcifications, Mucines acides,
Protéoglycans, Glycogène, Glycoprotéines neutres
Rouge Congo, violet de méthyle, Fer colloïdal, Fontana, Von
Kossa, Bleu alcian, PAS, PAS+amylase
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TECHNIQUES IMMUNOHISTOLOGIQUES
Mise en évidence de divers constituants cellulaires et
extracellulaires, surtout protéiques, par des anticorps
spécifiques couplés à un marqueur colorimétrique:
détermination du phénotype

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BIOLOGIE MOLÉCULAIRE
  Deux

types de techniques à partir d’un matériel
tissulaire:
 
 

Hybridation in situ basée sur l’observation
microscopique du signal
Techniques réalisées à partir d’extractions d’acide
nucléique.

  Détermination

du génotype

86

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HYBRIDATION IN SITU
 

 

 
 

Détection microscopique d’un
signal d’hybridation entre
une sonde marquée et un
acide nucléique (ADN ou
ARN).
Localisation des acides
nucléiques dans les
différents territoires d’un
tissu ou d’une cellule et
précision du type de cellule
contenant le signal.
Recherche virus (HPV, EBV)
Détection d’altérations
génétiques (cytogénétiques)
87

Dr Quatresooz P

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POLYMERASE CHAIN REACTION
 

 

 

Amplification in vitro d’une
séquence d’ADN
Extraction d’ADN à partir des
tissus et des cellules :
  coupes de tissu congelé et
culots de cytocentrifugation
  coupes de tissu fixé au formol
et inclus en paraffine
  liquide de Bouin : cassures de
ADN (résultats aléatoires)
Applications :
  Recherche réarrangement
génique
  Recherche virus
  Étude biologie tumorale :
 

 

Recherche mutations de gènes onco
et antioncogènes
Recherche expression de certains
gènes

88

Dr Quatresooz P

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6/02/13

INTERPRÉTATION DES IMAGES
  Incidences

de coupes

  Artéfacts: images artificielles créées par la

technique
 
 
 

Prélèvement: écrasement par pince
Fixation: retard de fixation, mauvais fixateur
Inclusion, coupe, coloration
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Incidence de coupes

Artefact

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