Controle microbiologique des medicaments 2012 2013 Bouttier .pdf



Nom original: Controle_microbiologique_des_medicaments_2012_2013_Bouttier.pdfTitre: Contrôle microbiologique des médicaments 2012 2013 [Mode de compatibilité] 2Auteur: HARMAND

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Contrôle des médicaments

Contrôle physicochimique
Contrôle microbiologique

S. Bouttier, UFR de Pharmacie, Université Paris Sud

Contrôle des médicaments


Sources de contamination



Contrôles microbiologiques



En cours de fabrication
Sur le produit fini

Contrôle microbiologique des médicaments

2

1

Contamination des médicaments



Contaminants


Particules inertes
Fibres
Verre
Poussières
Particules métalliques



Microorganismes



Contaminants chimiques
Traces de produits de nettoyage
Contrôle microbiologique des médicaments

3

Contamination microbiologique



Contamination par les micro-organismes






Bactéries
Levures
Moisissures

Présence de micro-organismes




Modification des médicaments
Diminuer ou annuler l’activité thérapeutique des
médicaments
Constituer un danger potentiel pour le patient

Contrôle microbiologique des médicaments

4

2

Sources de contamination


Matières premières








Principes actifs
Excipients

Eau
Personnel
Locaux et matériel
Air

Contrôle microbiologique des médicaments

5

Matières premières (MP)


Classement des MP en fonction du risque posé






Matières premières à risque faible




Contamination initiale
Teneur en eau
Origine

Acides, bases, produits anhydres

Matières premières à risque élevé


Matières premières d’origine naturelle

Contrôle microbiologique des médicaments

6

3

Matières premières


Limitation de la contamination


Prévoir une étape de décontamination non dénaturante
Traitement par la chaleur
Irradiation
Filtration stérilisante

Contrôle microbiologique des médicaments

7

Eau

Utilisation de l’eau en tant que
Matière première




Lavant




Excipient
Nettoyage des équipements et des contenants

Agent stérilisant


Stérilisation par la chaleur humide

Contrôle microbiologique des médicaments

8

4

Eau


Eaux à usage pharmaceutique


Traitement de l’eau potable
Filtration
Microfiltration
Ultrafiltration
Échange d’ions
Distillation

Contrôle microbiologique des médicaments

9

Eau


Limiter le risque de contamination


Conception de l’installation
Fonctionnement en continu
Éviter la stagnation de l’eau
Vidange et désinfection des équipements



Méthodes préventives



Méthode chimique
ozone
Méthode physique
Maintien à une température supérieure à 70°C

Contrôle microbiologique des médicaments

10

5

Personnel


Corps humain : grande quantité de microorganismes







Peau
Cuir chevelu
Voies respiratoires
Tube digestif

Dissémination des microorganismes




Par les gouttelettes de Pflügge
Par les squames
Par les mains
Contrôle microbiologique des médicaments

11

Contamination manuportée
Doigt posé
10 s sur un
milieu de
culture

Après
incubation
du milieu de
culture
observation
de colonies

Contrôle microbiologique des médicaments

12

6

Prélèvement d’un cheveu
Cheveu
déposé sur
un milieu
de culture

Après
incubation,
présence de
colonies le
long du
cheveu

Contrôle microbiologique des médicaments

13

Prélèvement buccal

Après
incubation,
présence de
nombreuses
colonies

Contrôle microbiologique des médicaments

14

7

Personnel


Limiter la contamination


Port de tenue adéquate
Gants
Masques
Charlottes
Surchausses
Si besoin tenue intégrale

Contrôle microbiologique des médicaments

15

Matériel et locaux


Risque élevé de contamination des matières premières
ou des médicaments entrant en contact avec les
surfaces



Mode de vie majoritaire des micro-organismes :
adhésion aux surfaces



Si conditions favorables


Formation d’un biofilm

Contrôle microbiologique des médicaments

16

8

17

Adhésion réversible

Contrôle microbiologique des médicaments

17

Adhésion irréversible

Contrôle microbiologique des médicaments

18

9

Multiplication des microorganismes avec production de polymères
(polymères représentés en jaune)
Contrôle microbiologique des médicaments

19

Colonisation du support et formation d’un biofilm
Le biofilm est constitué des microorganismes et des substances
extracellulaires qu’ils sécrètent, l’ensemble adhérant à un support
Contrôle microbiologique des médicaments

20

10



Exemple de biofilm

Contrôle microbiologique des médicaments

21

Biofilm


Détachement de portions de biofilms





Contamination du milieu environnant
Adhésion à un autre endroit du support

Elimination difficile

Contrôle microbiologique des médicaments

22

11

Matériel et locaux


Limiter le risque






Choix des matériaux utilisés (murs, sols, plafonds, plans de
travail)
Lisses, non poreux, faciles à nettoyer
Limiter les angles droits (entre sol et cloisons)
Choix du matériel de fabrication
Démontable, lisse, facile à nettoyer
Locaux
Séparation des zones à risque différent par des moyens
physiques appropriés
Locaux en surpression
Absence de croisement pour le circuit des matières
Contrôle microbiologique des médicaments

23

Air


Vecteur non négligeable de particules



Origine de la contamination





Nombre de particules




Environnement
Personnel

Quelques centaines de milliers à plusieurs millions/m3 d’air

Limitation du risque


Traitement de l’air
Contrôle microbiologique des médicaments

24

12

Prélèvement d’air
Recueil des
particules sur un
milieu de culture

Après incubation,
présence de colonies
sur le milieu de
culture

Contrôle microbiologique des médicaments

25

Fabrication du médicament



Minimiser ou éviter toute contamination du produit
Maîtrise des risques liés à la contamination à tous les
niveaux
Achat des matières premières

distribution du produit fini

Contrôle microbiologique des médicaments

26

13

Maîtrise de la contamination
Liée au type de produit fabriqué






Forme galénique
Formes liquides
Formes sèches
Comprimés
Poudres
Composition
Teneur en eau
Nature des matières premières
Voie d’administration
Voie cutanée
Voie parentérale
Contrôle microbiologique des médicaments

27

Fabrication des médicaments


Médicaments non stériles



Médicaments stériles



Préparations stérilisées dans leur récipient final
Répartition aseptique

Contrôle microbiologique des médicaments

28

14

Médicaments stériles


Produits stérilisés dans le récipient final




Préparation (dissolution ou mélange)
répartition
stérilisation après fermeture des récipients



Procédés de stérilisation
la chaleur humide
la chaleur sèche
l’irradiation



Validation des procédés de stérilisation

Contrôle microbiologique des médicaments

29

Médicaments stériles


Produits non stérilisés dans le récipient final
= répartition dans des conditions aseptiques


Filtration stérilisante
Préparation (dissolution)
filtration stérilisante
répartition aseptique dans des récipients préalablement
stérilisés
fermeture dans des conditions aseptiques

Contrôle microbiologique des médicaments

30

15

Médicaments stériles


Produits non stérilisés dans le récipient final
= répartition dans des conditions aseptiques


Préparation aseptique
Stérilisation des différents composés (principe actif,
excipients, solvant)
Mélange
Répartition aseptique dans des récipients préalablement
stérilisés
fermeture dans des conditions aseptiques

Contrôle microbiologique des médicaments

31

Médicaments stériles


Préparations non stérilisées dans leur récipient final




Risque de contamination plus important que dans la cas de
préparations stérilisées dans leur récipient final
Assurance de la stérilité Contrôles supplémentaires

Contrôle microbiologique des médicaments

32

16

Contrôle des médicaments


Différentes étapes de la fabrication




Contrôle en cours de fabrication
Contrôle des matières premières
Contrôle des eaux
Contrôle de l’environnement
Contrôle du personnel
Contrôle du procédé de fabrication
Contrôle du produit fini

Contrôle microbiologique des médicaments

33

Contrôle des médicaments


Référentiels





Pharmacopée Européenne (PE)
Bonnes pratiques de fabrication (BPF)

Organismes garant du respect des référentiels



Agence nationale de sécurité du médicament et des
produits de santé (ANSM)
Agence européenne des médicaments (EMA)

Contrôle microbiologique des médicaments

34

17

Laboratoire de contrôle


Sur le site de production
Sous-traitant



Prélèvement des échantillons






Respect du plan d’échantillonnage
Conditions d’hygiène rigoureuse



Transport des échantillons vers le laboratoire



Contrôle des échantillons

Contrôle microbiologique des médicaments

35

Laboratoire de contrôle


Bulletin d’analyse



Résultats conformes aux spécifications
Résultats non conformes : résultats hors spécifications
Enquête
Laboratoire
Production
Analyse des 5M

Contrôle microbiologique des médicaments

36

18

Analyse selon les 5M
Milieu

Matières

Main d’oeuvre

Matériel

Méthodes

Identification de la cause, rédaction d’un rapport, mesures correctives,
contrôle
Contrôle microbiologique des médicaments

37

Contrôle en cours de fabrication






Contrôle des matières premières
Contrôle de l’eau
Contrôle de l’environnement
Contrôle du personnel
Contrôle du procédé de fabrication

Contrôle microbiologique des médicaments

38

19

Contrôle des matières premières





Détermination de la biocharge = contamination
microbienne
Niveau de contamination fixé dans le cahier des charges
Contrôle des matières premières à réception

Contrôle microbiologique des médicaments

39

Contrôle de l’eau




Matière première la plus utilisée
Milieu plus ou moins favorable à la croissance des microorganismes
Exigences en matière de qualité de l’eau





Contrôles physico-chimiques
Contrôles microbiologiques

Surveillance



Au cours de la production
Lors de la conservation

Contrôle microbiologique des médicaments

40

20

Eaux à usage pharmaceutique


Production d’eau à partir d’eau potable


Eau purifiée
Eau hautement purifiée



Eau pour préparations injectables





Monographies de la Pharmacopée

Contrôle microbiologique des médicaments

41

Eaux à usage pharmaceutique


Eau purifiée




Eau hautement purifiée




Préparation de médicaments (eau de qualité supérieure à
l’eau purifiée)

Eau pour préparations injectables




Préparation de médicaments non stériles

Préparation de médicaments stériles

Lavage des équipements et récipients

Contrôle microbiologique des médicaments

42

21

Contrôle de l’eau




Prélèvement à différents endroits de l’installation de
traitement de l’eau
Biocharge






Eau purifiée
Eau hautement purifiée
Eau pour préparation injectable avant stérilisation

Contrôle de stérilité et essai des endotoxines


Eau stérilisée pour préparation injectable

Contrôle microbiologique des médicaments

43

Contrôle de l’environnement



Fabrication des médicaments dans un environnement contrôlé
Pour la fabrication des produits stériles




Définition de zones à atmosphère contrôlée
Zone dans laquelle la contamination particulaire et microbienne
est contrôlée
4 classes de zones à atmosphère contrôlée
Classement en fonction du risque

Risque faible

Classe C, D

Haut niveau de risque

Classe B

Contrôle microbiologique des médicaments

Classe A

44

22

Contrôle de l’environnement


Classe A : réalisation d’opérations à haut risque (remplissage
aseptique)



Classe B : environnement immédiat d’une zone de classe A



Classes C et D : zones à atmosphère contrôlée destinées aux
étapes moins critiques de la fabrication des médicaments
stériles

Contrôle microbiologique des médicaments

45

Contrôle de l’environnement


Contrôle particulaire de l’air





Surveillance des zones au repos et en activité
Nombre maximal autorisé de particules par m3 d’air
fonction de la classe :
taille des particules égale ou supérieure à 0,5 µm
taille des particules égale ou supérieure à 5 µm

Contrôle microbiologique
Surfaces
Air
Personnel
Surveillance des zones en activité






Limites recommandées en fonction de la classe (A, B, C
Contrôle microbiologique des médicaments
46
et D)

23

Environnement
Surveillance


Méthodologies




Contrôle des particules de l’air
NF EN ISO 14644
Contrôle microbiologique de l’air et des surfaces
NF EN ISO 14698

ISO international organization for standardization
EN norme européenne
NF norme française
NF EN ISO : Norme internationale (ISO) transposée en norme européenne (EN) et en norme nationale (NF)
Contrôle microbiologique des médicaments

47

Contrôle du personnel


Fabrication des médicaments stériles


Contrôle du personnel après toute opération critique
Empreinte de gants
Contrôle des tenues
Front
Avant-bras

Contrôle microbiologique des médicaments

48

24

Contrôle du procédé de fabrication
des médicaments stériles


Biocharge avant stérilisation terminale
Biocharge avant filtration stérilisante

Objectif : vérifier que la biocharge est faible



Répartition aseptique







Validation du procédé de répartition aseptique = TRA (test
de répartition aseptique) ou MFT (media fill test)
2 fois/an

Contrôle microbiologique des médicaments

49

Test de répartition aseptique


Simulation du procédé à l’aide d’un milieu de culture







Procédé de fabrication identique

Objectif : démontrer que le milieu de culture stérile le
reste pendant tout le procédé y compris le scellage des
contenants
Incubation des contenants 7 j à 20-25°C et 7 j à 30-35° C
Vérification de l’absence de croissance de
microorganismes dans l’ensemble des contenants

Contrôle microbiologique des médicaments

50

25

Contrôle du produit fini


Deux types de contrôle


Contrôle des médicaments non stériles



Contrôle des médicaments stériles

Contrôle microbiologique des médicaments

51

Pharmacopée européenne


Chapitre 2 : méthodes analytiques




Méthodes biologiques : chapitre 2.6
Ch. 2.6.1 : stérilité
Ch. 2.6.12 : contrôle microbiologique des produits non
stériles, essai de dénombrement

Chapitre 5 : textes généraux


Textes généraux sur la microbiologie : chapitre 5.1
Ch. 5.1.4 : Qualité microbiologique des préparations
pharmaceutiques
Contrôle microbiologique des médicaments

52

26

Contrôle des médicaments non
stériles
Vérifier que le nombre de microorganismes ne dépasse
pas le seuil fixé
Critères d’acceptabilité : Ch. 5.1.4 (PE)







Critères différents selon la voie d’administration
Voie orale
Voie rectale
Voie vaginale
Voies cutanée, buccale, nasale, auriculaire

Contrôle microbiologique des médicaments

53

Contrôle des médicaments non
stériles


Dénombrement microbien



Germes aérobies totaux
Moisissures et levures



Recherche de microorganismes spécifiés



Ch. 5.1.4. Voie cutanée




Dénombrement
Germes aérobies totaux (DGAT) : < 102/g
Moisissures et levures totales (DMLT) : < 101/g
Recherche de microorganismes spécifiés
Staphylococcus aureus : absence dans 1 g
Pseudomonas aeruginosa : absence dans 1 g
Contrôle microbiologique des médicaments

54

27

Contrôle des médicaments non
stériles


Méthodes de contrôle décrites
Ch. 2.6.12. Essai de dénombrement microbien
Ch. 2.6.13. Recherche de microorganismes spécifiés






Méthodes
Préparation de l’échantillon (dilution)
Méthode de contrôle
Milieux de culture et solutions





Contrôle microbiologique des médicaments

55

Dénombrement des microorganismes



Dénombrement sur plaques


Échantillon dilué

Ensemencement en surface

Milieu de culture

Incubation

Comptage des colonies

Contrôle microbiologique des médicaments

56

28

Dénombrement des microorganismes



Dénombrement sur plaques


Ensemencement en profondeur
Échantillon dilué

Introduction du
milieu de culture

Incubation

Comptage des colonies
Contrôle microbiologique des médicaments

57

Dénombrement des microorganismes



Filtration sur membrane






Échantillon dilué est filtré sur une membrane retenant les
microorganismes
Dépôt de la membrane sur un milieu de culture
Incubation
Comptage des colonies

Contrôle microbiologique des médicaments

58

29

Recherche de microorganismes spécifiés








Ensemencement de l’échantillon dilué dans un milieu de
culture liquide (étape d’enrichissement)
Incubation
Isolement sur un milieu sélectif
Incubation
Présence ou absence de colonies caractéristiques ?

Contrôle microbiologique des médicaments

59

Contrôle des médicaments stériles


Caractéristiques


Stérile
Apyrogène



Aparticulaire



Contrôle microbiologique des médicaments

60

30

Contrôle des médicaments stériles


Essai de stérilité : ch. 2.6.1 (PE) essai s’applique aux
substances, préparations, produits qui doivent être
stériles selon la Pharmacopée



Vérification de l’absence de microorganismes viables
dans un échantillon contrôlé

Contrôle microbiologique des médicaments

61

Essai de stérilité (2.6.1 PE)





Méthodologie
Milieux de culture
Quantités minimales de produit à utiliser
Nombre minimal d’unités à contrôler fonction de la taille
du lot

Contrôle microbiologique des médicaments

62

31

Essai de stérilité


Deux méthodes







Filtration sur membrane
Échantillon filtré dans un appareil contenant une
membrane retenant les microorganismes
Introduction du milieu de culture
Ensemencement direct
Ensemencement du milieu de culture avec l’échantillon

Deux milieux de culture différents
Incubation à deux températures différentes
Croissance d’un maximum de microorganismes
Contrôle microbiologique des médicaments

63

Essai de stérilité






Pendant l’incubation et après 14 jours d’incubation,
observation des milieux
Si absence de croissance microbienne dans les milieux de
culture
Le lot de produit à examiner satisfait à l’essai de
stérilité
Si observation de signes de croissance microbienne dans
les milieux de culture
Le lot de produit ne satisfait pas à l’essai

Contrôle microbiologique des médicaments

64

32

Essai de stérilité


Impossible de contrôler chacun des récipients





Extrapolation à l’ensemble du lot
Plan d’échantillonnage approprié
Examen des échantillons en début et en fin d’opération

Conditions rigoureuses d’asepsie




Manipulation dans un isolateur stérile

Contrôle de l’environnement de travail



Air
surfaces
Contrôle microbiologique des médicaments

65

Essai des endotoxines (2.6.14 PE)



Détection ou quantification des endotoxines produites
par les bactéries à Gram négatif
Substances pyrogènes les plus fréquentes
Toxiques par voie parentérale à l’état de traces (ng)



Dosage des endotoxines









Contact des endotoxines avec le sang du limule entraîne sa
coagulation
Concentration en endotoxines inférieure à la limite
spécifiée pour le produit

Contrôle microbiologique des médicaments

66

33

Bilan des contrôles



Résultats des contrôles en cours de fabrication
Résultats des contrôles du produit fini
Libération du lot ?

Contrôle microbiologique des médicaments

67

Limites des méthodes utilisées


Dénombrement et recherche




Résultats dépendants
Choix des milieux de culture
Choix des températures d’incubation

Méthodes fondées sur la croissance des microorganismes



Non automatisables
Délai long pour l’obtention des résultats (délai minimum : 5
jours)
Attente pour la libération des produits
Retard dans la prise de mesures correctives
Contrôle microbiologique des médicaments

68

34

Développement de méthodes alternatives


Obtention de résultats dans un délai plus court





Exemple : mesure directe avec différenciation et
visualisation des microorganismes





Libération du lot plus rapide
Mise en place d’actions correctives plus précoce

Pas de mise en culture des microorganismes
Obtention du résultat en quelques heures

Remplacement des méthodes classiques par les
méthodes alternatives


possible si performance est au moins équivalente à
celle de la méthode classique
Contrôle microbiologique des médicaments

69

Méthodes alternatives


Validation des méthodes





Qualification complète de l’équipement
Étude comparative de la méthode officielle et de la
méthode alternative

Applicables à différents contrôles




Contrôle des produits finis
Contrôle de l’environnement
Contrôle de l’eau

Contrôle microbiologique des médicaments

70

35

Conclusion


Importance des contrôles : libération du produit



Obtention d’un médicament de qualité






Bonne maîtrise de l’ensemble des procédés
Respect des bonnes pratiques de fabrication
Formation du personnel

Importance de la gestion des risques



Maîtrise des points critiques
Meilleure maîtrise de la qualité

Contrôle microbiologique des médicaments

71

36


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